a)

Antigen: antigenet ska innehålla specifikt glykoprotein från enzootiskt bovint leukosvirus (BLV) som har standardiserats i förhållande till E05-serumet.

b)

Det serum som ska analyseras.

c)

Ett känt positivt kontrollserum.

d)

Agargel:

—

Antigen: 32 mikroliter.

—

Kontrollserum: 73 mikroliter.

—

Det serum som ska analyseras: 73 mikroliter.

a)

Ett serum som ska analyseras är positivt om det bildar en specifik precipitationslinje med antigenet för bovint leukosvirus och denna kurva är identisk med kontrollserumets.

b)

Ett serum som ska analyseras är negativt om det inte bildar en specifik precipitationslinje med antigenet för bovint leukosvirus och om det inte böjer av kontrollserumets linje.

c)

Reaktionen kan inte betraktas som tillförlitlig om

a)

40 ml agar på 1,6 i 0,05 M Tris/HCl buffert, pH 7,2 med 8,5 % NaCl.

b)

15 ml bovin leukos-serum som endast har antikroppar mot glykoproteinerna i bovint leukosvirus, i utspädning 1:10 i 0,05 M Tris/HCl buffert, pH 7,2 med 8,5 % NaCl.

c)

15 ml av ett bovin leukos-serum som endast har antikroppar mot glykoproteinerna i bovint leukosvirus, i utspädning 1:5 i 0,05 M Tris/HCl buffert, pH 7,2 med 8,5 % NaCl.

d)

Fyra petriskålar av plast med en diameter på 85 mm.

e)

En stans med en diameter på 4–6 mm.

f)

Ett referensantigen.

g)

Det antigen som ska standardiseras.

h)

Ett varmt vattenbad (56 °C).

a)

Petriskålarna 1 och 3:

i)   Brunn A= outspätt referensantigen.

ii)   Brunn B= referensantigen i utspädning 1:2.

iii)   Brunnarna C + E= referensantigen.

iv)   Brunn D= outspätt antigen som ska analyseras.

b)

Petriskålarna 2 och 4:

i)   Brunn A= outspätt antigen som ska analyseras.

ii)   Brunn B= antigen som ska analyseras, i utspädning 1:2.

iii)   Brunn C= antigen som ska analyseras, i utspädning 1:4.

iv)   Brunn D= antigen som ska analyseras, i utspädning 1:8.

a)

För optimal precipitation bör testet göras med serum i två spädningar (1:5 och 1:10).

b)

Om precipitationsdiametern är för liten med båda spädningarna ska serumet spädas ut ytterligare.

c)

Om precipitationsdiametern är för hög med båda spädningarna och om precipitationen försvinner ska en lägre serumutspädning väljas.

d)

Agarens slutliga koncentration ska stabiliseras vid 0,8 % och serumens vid 5 % respektive 10 %.

e)

De uppmätta diametrarna ska ritas in i nedanstående koordinatsystem. Den utspädning som ska användas är den som har samma diameter för det antigen som ska analyseras som för referensantigenet.

a)

Mikroplattor för den fasta fasen, skålar eller varje annan fast fas.

b)

Antigenet ska bindas till den fasta fasen med eller utan hjälp av polyklonala eller monoklonala fästande antikroppar. Om man i fråga om enzootisk bovin leukos låter antigenet fästa direkt till den fasta fasen ska alla undersökta prov som uppvisar positiv reaktion undersökas i förhållande till kontrollantigenet. Kontrollantigenet ska vara identiskt med antigenet men sakna antigenet för bovin leukos. Om fästade antikroppar fästes till den fasta fasen får dessa antikroppar inte reagera med andra antigen än antigenet för bovin leukos.

c)

Den biologiska vätska som ska undersökas.

d)

Motsvarande positiva och negativa kontroller.

e)

Konjugatet.

f)

Ett substrat som är anpassat till det enzym som används.

g)

Vid behov en stopplösning.

h)

Lösningar för utspädning av de prov som ska undersökas, beredning av reagensen och tvättning.

i)

Ett avläsningssystem som lämpar sig för det substrat som används.

a)

Elisatest får användas på prover från mjölk och serum.

b)

När Elisatest används för utfärdande av intyg i enlighet med artikel 6.2 c eller för fastställande av besättningsstatus i enlighet med bilaga D.I ska sammanslagningar av serum- eller mjölkprover ske på ett sådant sätt att de prover som tagits för att undersökas utan minsta tvivel kan hänföras till de enskilda djur som ingår i samlingsprovet. Alla kontrolltester ska utföras på prover från enskilda djur.

c)

När Elisatest används på ett prov från opaketerad mjölk ska detta prov tas från en besättning med minst 30 % lakterande mjölkkor. Alla kontrolltester ska utföras på serum- eller mjölkprover från enskilda djur.”