Post de Rim Frikha🦋

#La #différence #entre #la #mutagenèse #aléatoire #et #la #mutagenèse #dirigée: ■Mutagenèse aléatoire: ●Principe: Les mutations sont introduites de manière aléatoire dans le génome, sans cibler une séquence spécifique. ●Agents mutagènes: Les agents mutagènes utilisés sont variés et peuvent être physiques (rayonnements UV, rayons X), chimiques (substances alkylants, analogues de bases) ou biologiques (virus, transposons). ■Mutagenèse dirigée: ●Principe: Les mutations sont introduites à un endroit précis du génome, avec une séquence nucléotidique modifiée de manière spécifique. ●Techniques: Les techniques de mutagenèse dirigée sont nombreuses et en constante évolution, mais elles reposent généralement sur des enzymes de restriction et des ligases pour couper et recoller l'ADN, ainsi que sur des oligonucléotides synthétiques complémentaires de la séquence à modifier. Parmi les techniques les plus utilisées, on peut citer : ☆☆PCR site-dirigée: Elle permet de modifier de petits fragments d'ADN. ☆☆CRISPR-Cas9: Cette technique révolutionnaire permet de modifier l'ADN de manière très précise et efficace..

L’immunohistochimie (IHC) est une technique de laboratoire qui utilise des anticorps pour tester, détecter et visualiser des protéines ou des antigènes spécifiques dans des coupes de tissus en utilisant une combinaison de techniques immunologiques, anatomiques et biochimiques. Cette méthode implique la liaison d’anticorps conjugués à un marqueur détectable, tel qu’une enzyme ou un colorant fluorescent, aux tissus cibles. Voici comment cela fonctionne : 1️⃣ Tissu cellulaire fixe : Les échantillons de tissus sont conservés pour maintenir les structures protéiques. 2️⃣ Anticorps primaire : Se lie spécifiquement à la protéine cible dans le tissu. 3️⃣ Anticorps secondaire : Se lie à l’anticorps primaire et est lié à une enzyme comme la peroxydase ou la phosphatase alcaline. 4️⃣ Réaction enzymatique : L’enzyme réagit avec un substrat pour générer un produit coloré, marquant l’emplacement de la protéine cible. Cette technique est largement utilisée dans le diagnostic du cancer, la pathologie et la biologie moléculaire.

Je passe un nouveau appel à la communauté scientifique qui cette fois-ci maitrise les systèmes de transfection cellulaire. Voici ma problématique : j'ai un plasmide que je trouve de grande taille (10 kb) à transfecter dans la lignée cellulaire hépatocytaire HepaRG. Jusqu'à présent j'ai testé deux réactifs à priori de type lipidique (formule secrète) : un de chez Promega (Viafect) et le second de chez Roche (X-tremeGENE 360). Pour les deux réactifs j'ai une faible efficacité (Roche > Promega) et aux fortes doses d'ADN j'ai de la toxicité (Roche >> Promega). Comme le plasmide est gros, je me pose la question de savoir s'il existe des agents chimiques et/ou peptidiques qui pourraient compacter le plasmide pour le rendre virtuellement plus petit puis d'utiliser cette "version" plus petite avec les agents de transfection cités ci-dessus pour accroitre l'efficacité de transfection. Je vous remercie par avance pour vos retours et suggestions. PS : Est ce que des personnes ont déjà testé en combinaison la lipofection et l'électroporation ? Dit autrement, transfecter des complexes ADN-lipide par électroporation.

#recherche 👀 A lire sur le site du CNRS "Mieux comprendre le mode d’action des structures amyloïdes dans la mort cellulaire", une présentation de travaux menés au CBMN - Institut de Chimie & Biologie des Membranes et Nano-objets 🔎 🎯 Des peptides, petits morceaux de protéines, secrétés par certaines bactéries pathogènes comme le Staphylococcus aureus, contribuent à leur virulence et aux infections graves provoquées chez l'humain en s’agrégeant sous une forme particulière. Les chercheurs du CBMN ont montré en quoi cette forme participe à la toxicité et la virulence de cette bactérie. 👩🔬 👩⚕️ 📖 L'étude a été publiée dans la revue Nanoscale Horizons 👏 ➡ Pour lire l'article du CNRS c'est ici https://lnkd.in/eXJrdaQC ➡ Pour en savoir plus sur l'étude https://lnkd.in/egpynzXJ #peptide #amyloïde #staphylococcus Katlyn Jumel Anthony VIAL Lucie Khemtemourian Cecile Feuillie Sophie Lecomte Marion MATHELIE-GUINLET

L’impact inattendu du chromosome Y sur le vieillissement et la maladie chez les hommes. Dans un article de synthèse publié récemment dans la revue Nature Reviews Genetics, des chercheurs ont discuté des connaissances actuelles concernant la perte du chromosome Y (LOY) et ses effets sur diverses maladies et le système immunitaire. Leurs conclusions indiquent que LOY est une mutation dynamique qui affecte considérablement le fonctionnement immunitaire, soulignant son rôle en tant que biomarqueur potentiel et cible thérapeutique. Lire: https://lnkd.in/ey6MJ52y #biotech #sciencesdelavie #recherche #biopharma #pharmaceutique #decouverte

Les fonctions de la membrane cellulaire C'est une sorte de sas de sécurité qui ne laisse pas tout passer et les protéines à sa surface sont ses gardiens qui aident les cellules à répondre aux signaux externes comme les hormones, les ions et même la lumière. Ces protéines jouent un rôle dans les réponses immunitaires et la reconnaissance cellulaire, permettant aux cellules de s'identifier mutuellement. Elle est également appelée membrane plasmique, membrane cytoplasmique, voire plasmalemme. Elle est constituée d'une bicouche lipidique comprenant des phospholipides et du cholestérol permettant d'ajuster la fluidité de l'ensemble en fonction de la température, ainsi que des protéines membranaires intégrales ou périphériques. Les premières jouant généralement le rôle de transporteurs membranaires tandis que les secondes interviennent souvent dans les processus intercellulaires, l'interaction avec l'environnement, voire les changements de forme de la cellule. La membrane plasmique contrôle les échanges de matière entre l'intérieur et l'extérieur de la cellule et de ses organites. Elle présente ainsi une perméabilité sélective aux ions et aux petites molécules. Les membranes plasmiques interviennent par ailleurs dans une variété de processus cellulaires comme l'adhérence cellulaire, la conductivité ionique et la signalisation cellulaire. Elles servent aussi de support à des structures extracellulaires comme la paroi cellulaire, le glycocalyx et le cytosquelette. Sources : Wikipedia et facts_and_stuff_by_d https://lnkd.in/diT3qs3Z #biology #biologie #science #cellules #topvoice LinkedIn Guide to Creating Post non sponsorisé. Dm pour crédit ou suppression.

[Point publication 📰] ➡ La dérégulation de l'axe p19/CDK4/CDK6 dans les mégacaryocytes Jak2V617F accélère le développement de la myélofibrose. L’équipe d’ Hana Raslova et Isabelle Plo de l’UMRS1287 (Inserm/Université Paris-Saclay/Gustave Roussy) a généré un modèle murin permettant l’induction rapide et homogène de la MF, normalement obtenue de façon lente et hétérogène avec la mutation Jak2V617F seule, en la combinant à la délétion de l’inhibiteur du cycle cellulaire, p19Ink4d. L’équipe avait précédemment montré le rôle de la délétion de p19 dans la ploidization des mégacaryocytes (MKs) ; cellules qui représentent le principal réservoir du facteur de croissance TGFb1. Les résultats montrent, dans ce nouveau modèle, une accélération de la MF due à l’amplification des MKs de très haute ploïdie par rapport à Jak2V617F seul. Ces MKs sont localement activés dans la moelle osseuse et secrètent de façon anormale des protéines stockées dans leurs granules, y compris le TGFb1 qui une fois activé déclenche le développement rapide de la MF. Lire la publication ⤵

#RT-PCR #ARN #moleculaire La RT-PCR (réaction en chaîne par polymérase avec transcription inverse) est une technique essentielle dans le domaine de la biologie moléculaire, particulièrement pour la détection et l'analyse des acides nucléiques. Voici un aperçu des techniques de RT-PCR, leur fonctionnement et leur importance. Qu'est-ce que la RT-PCR? La RT-PCR est une méthode qui permet de détecter et quantifier l'ARN dans un échantillon. Elle est particulièrement utilisée pour diagnostiquer des infections virales, comme celle causée par le virus responsable de la COVID-19. La technique repose sur deux étapes principales : Transcription inverse : L'ARN est converti en ADN complémentaire (ADNc) par l'enzyme transcriptase inverse. Amplification : L'ADNc est amplifié par PCR, permettant ainsi d'obtenir une quantité suffisante pour l'analyse. Applications de la RT-PCR Diagnostic médical : La RT-PCR est largement utilisée pour détecter des pathogènes, notamment des virus. Par exemple, elle a été cruciale pour le diagnostic rapide de la COVID-191. Recherche scientifique : Elle permet d'étudier l'expression génique et d'analyser les niveaux d'ARN dans divers contextes biologiques. Contrôle de qualité : Dans les laboratoires, la RT-PCR est utilisée pour assurer la qualité des produits biopharmaceutiques. Avantages de la RT-PCR Sensibilité élevée : Elle peut détecter de très faibles concentrations d'ARN, ce qui est essentiel pour le diagnostic précoce. Rapidité : Les résultats peuvent être obtenus en quelques heures, ce qui est crucial dans un contexte clinique. Spécificité : Grâce à l'utilisation d'amorces spécifiques, la RT-PCR peut cibler des séquences d'ARN précises. Conclusion La RT-PCR représente une avancée majeure dans le diagnostic et la recherche biologique. Sa capacité à fournir des résultats rapides et précis en fait un outil indispensable dans divers domaines, allant de la médecine aux sciences fondamentales. En tant que professionnels, comprendre et maîtriser cette technique nous permet non seulement de contribuer à la santé publique mais aussi d'avancer dans nos recherches scientifiques. N'hésitez pas à partager vos expériences ou à poser vos questions sur cette technique fascinante !

Génial

De l’ADN aux protéines : une danse moléculaire parfaitement orchestrée ! L’expression des gènes est un processus d’une coordination remarquable : - Transcription de l’ADN en ARNm par l’ARN polymérase - Traduction de cet ARNm en protéines au sein du ribosome Chez les bactéries, ces étapes sont couplées : les ribosomes traduisent l’ARNm au fur et à mesure de sa synthèse. Une étude publiée dans Science dévoile, à l’échelle moléculaire, comment ces mécanismes collaborent. Ces découvertes approfondissent notre compréhension des fondements de la vie et ouvrent la voie à de nouvelles avancées en biotechnologie et en médecine. https://lnkd.in/enrUisin